浙江重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

來源：發布時間：2025-08-18

湖州申科采用免疫磁珠分離（IMBS）結合 2D 電泳或者 LC-MS 的方法評估抗體覆蓋率。IMBS主要流程包括多克隆抗體與磁珠偶聯，磁珠未結合位點的封閉，HCP樣本與結合抗體的磁珠共同孵育，此過程中 HCP 抗體結合可以識別的 HCP，而未識別的 HCP 則通過后續洗滌步驟去除，再通過低 pH等洗脫條件收集抗體捕獲的HCP。該方法擁有 AAE(Antibody Affinity Extraction)免疫層析柱分離的所有優點，同時免疫磁珠可以在懸浮的條件下與 HCP樣品充分混勻結合，HCP結合效果更佳，由于采用磁珠吸附可以減少 HCP與填料的非特異性吸附，提高實驗準確性。

HCP檢測的經典方法是ELISA法，但該方法在檢測過程中存在漏檢風險，需要對試劑盒抗體進行抗體覆蓋率評估。浙江重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

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湖州申科在宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術領域擁有深厚的積累，已成功構建高質量、全流程的自有開發平臺，覆蓋HCP檢測試劑盒研發的關鍵環節：①抗原表征與制備：基于合規平臺的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進技術確保抗原庫的代表性。②動物免疫與抗體制備：依托自有免疫動物平臺，控制免疫原設計與動物免疫過程，產出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發與驗證：憑借成熟的技術經驗開發高靈敏度、高穩定性的檢測體系，并嚴格遵循GMP標準完成方法學驗證。該平臺通過全流程自主可控的技術整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發的HCP ELISA試劑盒已成功服務于國內外200余家生物醫藥企業，為生物制品（如單抗、疫苗）的工藝開發、質量控制及法規申報（如IND/BLA）提供符合監管要求的定制化檢測解決方案。

MDCK宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析湖州申科系列HCP檢測產品均進行了校準品的表征分析，抗體覆蓋率分析。

宿主細胞殘留蛋白（HCP）檢測是生物制品質量控制的關鍵環節，采用基于抗體的免疫學方法（如ELISA）。然而，不同試劑盒之間的檢測結果常存在明顯差異，關鍵原因在于其依賴的關鍵組分——HCP校準品和檢測抗體——本身制備與表征的高度可變性。校準品作為定量的基準，其復雜性極大。不同供應商在制備時使用的細胞來源、培養及表達條件、宿主蛋白提取純化工藝（例如目標產物去除策略）差異明顯，導致校準品的組成、代表性及穩定性各不相同。同樣，檢測抗體（尤其是多抗）通過免疫動物獲得，其特異性與覆蓋度受免疫原、動物應答個體差異、免疫方案及后續抗體篩選/純化過程的影響巨大，不同批次或來源抗體的識別譜（如對不同HCP的親和力、對低豐度蛋白的靈敏度）存在本質差別。正是這些關鍵組分固有的明顯變異度，導致不同試劑盒對同一樣本的檢測結果在數值上、甚至特定HCP的檢出能力上可能出現較大偏差。因此，為確保檢測結果真實反映自身產品的HCP殘留情況，企業應結合自身產品特性和工藝，對不同試劑盒進行詳細的平行比對與適用性評估，以篩選出匹配度較高的檢測方案。

昆蟲細胞桿狀病毒表達系統（IC-BEVS）是以桿狀病毒作為外源基因載體，以昆蟲細胞作為宿主進行外源蛋白生產的真核表達系統。BVES具有易于規模化生產、培養成本低、生物安全性高等優勢，近年來陸續被研究用于生產重組蛋白、rAAV載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等，在生物制品重組蛋白表達領域已有普遍運用。Sf9來源于草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，Sf），是目前較常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），可定量檢測使用Sf9細胞系生產的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測。試劑盒抗體覆蓋率為70.4%-96.0%（IMBS-2D）和91.2% (IMBS-MS，Unique Peptide ≥2）。

為確保HCP ELISA檢測產品符合申報要求，湖州申科在試劑盒的全流程開發方案嚴格按照法規要求。

為了更好地控制工藝和保證產品質量的穩定，各國監管機構均要求提供使用的宿主細胞蛋白殘留檢測ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數據。一般需進行覆蓋率分析的場景一般有以下幾種情況：①臨床II期后，若是繼續使用商品化試劑盒，則需要評估試劑盒抗體覆蓋率是否可以繼續用于質量監控；②臨床III期及以后階段，產品研究者開發了平臺化或工藝專屬型的HCP監測方法，該類試劑盒在使用前要評估覆蓋率水平與商業化覆蓋水平的差異；③申報時沒有提交覆蓋率數據，監管機構可能會對企業提出發補的要求；④產品上市后發生了包括生產場地變更，工藝變更，HCP分析方法變更等因素的變更，研究者則需要評估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對藥品質量與安全帶來的影響。

湖州申科宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒校準品凍干保存，穩定性超 10 年，保障長期供應。江蘇畢赤酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

HCP 定制化開發需構建成熟平臺、技術實力、合規體系、穩定供應、專業團隊及成功案例的全維度支撐體系。浙江重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

對于HCP抗體的純化方法，目前美國藥典1132章節推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優缺點，均符合監管的要求。在實際使用過程中，這對不同產品可能會導致檢測結果的差異。兩者方法得到的抗體主要區別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會導致針對某些樣本的檢測結果比前者偏低，需要企業在實際方法建立時進行充分的評估。HCP抗原親和柱層析法對純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問題。

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標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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